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研究结论 | 免疫球蛋白制剂不会传播HIV

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研究结论 | 免疫球蛋白制剂不会传播HIV

     实验研究证明,低温乙醇工艺能完全清除和灭活可能污染混合血浆的HIV。大量流行病学和临床研究表明,接受HIV抗体阳性的免疫球蛋白注射者未出现HIV抗体阳转。由此可见,用低温乙醇法制备的免疫球蛋白制剂是安全的,不会引起HIV传播。

低温乙醇法清除和灭活HIV的效率

     目前国际上用于大规模生产免疫球蛋白的低温乙醇法有两种:一种是Cohn-Oncley法;另一种是Kistler和Nitschmann法。

 

     美国食品和药物管理局(FDA)药品生物制品中心Wells等对Cohn-Oncley法灭活HIV的效果进行了实验研究。他们在蛋白分离各步骤中加入Ш型人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV-Ш,HIV的原名),然后测定6道沉淀步骤灭活和清除HTLV-п的效率。结果发现每道步骤能清除病毒103-104体外感染单位(IVIU)/ml,整个低温乙醇工艺累计消除HTLV-п的效率可达1x1035(IVIU)/ml以上。美国Cutter生物制品公司和疾病控制中心(CDC)合作研究了Cohn-Oncley法对加入的两种逆转录病毒小鼠嗜异性C型病毒和淋巴腺病(LAV,HIV的原名)的清除效率,结果表明,从血浆到沉淀п,逆转录病毒感染性程度降低105-108倍。PH4处理可降低程度103-105倍。奥地利Immuno公司Dorner等报道Cohn-Oncley法等报道低温乙醇法可降低HIV-1和HIV-2的程度。

 

     法国巴斯德研究所Henin等研究了Kisteal和Nitshmann法灭活和清除HIV的效率。他们在原料血浆中加入LAV-1,然后测定各道沉淀步骤后的逆转录酶活性(RTA)和病毒感染性。结果表明,经初步沉淀后,病毒负荷量降低104倍,在最后各分离步骤中病毒负荷又至少降低108。说明用Kisteal和Nitshmann法制备免疫球蛋白能完全清除HIV活性,其效果与Cohn-Oncley法一致。

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                                                 《回收Cohn氏组分Ⅳ沉淀中白蛋白的方法》

 

     低温乙醇工艺中有三种不同的作用结合起来导致HIV的消除:1、乙醇对病毒的灭活作用。已证明,25%的乙醇能有效灭活HIV;2、病毒在分离过程中进入废弃部分。美国FDA Zuck等报道。将HTLV-Ш加入Cohn-Oncley工艺的不同步骤中,经过多道步骤的分离和灭活,99.5%的HTLV-п进入沉淀п中,后者是制备免疫球蛋白过程中的废弃部分;3、冻融步骤对HIV的破坏作用。

 

     此外,在制备静脉注射免疫球蛋白(IVIG)时,采用低PH条件下的胃酶处理步骤,可进一步降低病毒程度104-1015倍。

 

     美国红十字会用蛋白印迹法(WB)检测,每万名献血员中约有3.8人HTLV-п抗体阳性,筛检试验的灵敏度为98.3%-99.8%。Wells等测定43名HTLV-п感染者血浆感染性程度为0.02IVIU。根据以上数据推算,如果献血员未经筛检,则每1000升混合血浆约含7.6IVIU;如果献血员经过筛检。则每1000升混合血浆仅含0.13IVIU。由此可见,低温乙醇工艺所能清除和灭活的HIV量远远超过了美国混合血浆中可能污染的病毒量。Henin等亦报道,用抗原捕获试验检测,HIV抗体阳性献血员血液所含HIV为1ng/ml以下。而在灭活实验中加入的HIV抗原约为15ug/ml。因此,实际加入的病毒浓度至少比HIV抗体阳性献血员血液中的病毒负荷高100-1000倍。

 

流行病学、临床和实验研究

 

     1992年修订的《who血浆、血液成分和血浆衍生物采集、加工和质量控制规程》,明确指出,用低温乙醇法制备的免疫球蛋白具有充分证实的不受HIV污染的临床记录。此外,Eibi、Hellstern和Schiff等许多作者复习了大量文献,证明肌注和静注免疫球蛋白制剂不是传播HIV的来源。本文作者检索了Medlne光盘,到1996年6月为止,未见免疫球蛋白传播HIV的文献报道。

 

     虽然美国CDC规定,在筛检献血员时,把HIV抗体阳性与HIV的存在等同等看待,但是,在免疫球蛋白制剂中发现HIV抗体并不表明有传染性。市售免疫球蛋白中检出HIV抗体现象已屡见不鲜,Gocke等用ELISA检查了17批不同厂家的制品,发现16批呈HTLV-п抗体阳性,经蛋白印遂法确证,至少有10批抗体阳性。许多研究人员对HIV抗体阳性免疫球蛋白制品是否会传播HIV,进行了大量回顾性和前瞻性研究,Tedder等曾给19例血液透析患者注射31剂含高浓度的HTLV-п抗体的免疫球蛋白制剂,六个月后,这些患者均未见血清HTLV-п抗体阳转,情况良好。Phillipss等给16名健康志愿者肌肉注射HIV抗体阳性的乙型肝炎免疫球蛋白,注射后24周采集血清标本检测HIV抗体,均为阴性。Hein等报道的给6名健康志愿者静脉注射HIV抗体阳性的免疫球蛋白,连用5天,两年后采集血清,用ELISA检测未见HIV抗体阳转,亦无T细胞亚群改变,健康情况良好。他们还对5例接受HIV抗体阳性的免疫球蛋白静脉注射的特发性血小板减少症患者随访4周-18个月,用WB检测患者血清HIV抗体,均为阴性,亦无免疫状态改变证据。

 

     我国有许多患者在1981-1987年间曾接受HIV抗体阳性的进口免疫球蛋白制剂注射,济宁市卫生防疫站研究人员随机采取其中334人的血清,用间接免疫荧光抗体试验和WB检测,未见HIV抗体阳转。

 

     此外,美国Abbot药厂Cummins等报道,用血清HIV-1阳性献血员的混合血浆制备含高浓度HIV抗体的IVIG,给2只幼年黑猩猩注射。经细胞培养、聚合酶链反应(PCR)和对HIV蛋白的IgM免疫应答检测表明,该制剂未在黑猩猩体内引起HIV传播。

 

     上述研究结果充分说明,HIV抗体阳性的免疫球蛋白制剂不会引起HIV传播。